目的 观察重组腺病毒-p21(rAd-p21)对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)增生的作用。 方法 体外培养RF/6A细胞系,分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、rAd-p21转染组及阴性对照组,并转入相应的质粒表达载体。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及蛋白免疫印迹(Western blot)检测p21 mRNA及蛋白在RF/6A细胞中的表达;应用流式细胞仪检测p21基因对RF/6A细胞周期的影响;行内皮细胞体外成管实验观察p21基因对RF/6A细胞成管的抑制作用。 结果 rAd-p21转染组p21 mRNA及蛋白表达显著增高。细胞周期检测发现PBS组、rAd-p21转染组及阴性对照组G0/G1期细胞百分比分别为(40.76 ± 6.66)、(67.45 ± 11.61)、(41.55 ± 8.99)%;rAd-p21转染组RF/6A细胞出现G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增多,与PBS组和阴性对照组比较,差异有统计学意义(F=21.284,P=0.000)。体外成管实验显示PBS组、rAd-p21转染组及阴性对照组每一视野下内皮细胞成管数分别为(8.25±3.19)、(3.86±1.21)、(7.62±2.69)个;rAd-p21转染组内皮细胞管数较少,与PBS组和阴性对照组比较,差异有统计学意义(F=7.138,P=0.004)。 结论 rAd-p21可成功转染RF/6A 细胞并稳定表达p21 mRNA及蛋白,并可显著抑制其增生。 |