目的 通过腺相关病毒（AAV）载体介导人β-神经生长因子（β-NGF）基因和人血小板源性生长因子基因B（PDGF-B）联合转染体外培养的猫角膜内皮细胞，探讨其对该细胞生物学效应的影响。
方法 体外培养猫角膜内皮细胞。构建AAV载体，利用AAV载体介导绿荧光蛋白(GFP)基因转染猫角膜内皮细胞，根据其阳性表达率测定转染效率。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫角膜内皮细胞后，Real-Time PCR及Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测转染24h、48h、72h后β-NGF和PDGF-B的表达变化。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫角膜内皮细胞72小时后，MTT检测细胞增殖能力的变化，流式细胞仪测定处于G1期的细胞比例，检测外源基因对细胞周期的影响。划痕实验观察AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B对细胞迁移能力的影响。
结果 猫角膜内皮细胞体外培养可形成完整的细胞单层。AAV介导的绿色荧光蛋白基因转染猫角膜内皮细胞72h后测得转染效率可达67.8%。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫内皮细胞后，Real-Time PCR和Western blot结果显示，转染后各时间点猫角膜内皮细胞中β-NGF和PDGF-B的mRNA和蛋白表达随时间延长不断增高，与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。联合转染组中β-NGF和PDGF-B在不同时间点的表达与单独转染组差别无统计学意义（P﹥0.05）。MTT结果显示，AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫角膜内皮细胞后增殖能力较对照组增强，联合转染组更为明显，差别均有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染组细胞周期中G1期细胞比例增加，联合转染组增加更为明显。划痕实验表明，AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B转染后可以增强细胞迁徙能力，联合转染组效果更为明显，差异具有统计学意义（P<0.05）。
结论 AAV可有效介导人β-NGF基因和PDGF-B基因转染体外培养的猫角膜内皮细胞，并在猫角膜内皮细胞中持续稳定表达。AAV-β-NGF和AAV-PDGF-B分别和联合转染猫角膜内皮细胞后可以增强细胞的增殖和迁移能力,联合转染的效果更加明显。