NYD-SP15基因的原核表达及多克隆抗体的制备
刘庆淮1 王珍1,2 李建民2
（1.江苏省人民医院眼科，南京，210029；
2.南京医科大学生物遗传学实验室，南京，210029）
[摘要]：目的 克隆NYD-SP15基因，构建融合表达载体，在大肠杆菌中表达，并制备抗体。方法 PCR技术扩增NYD-SP15全长开放阅读框，克隆入原核表达载体PET28a，转化大肠杆菌感受态细胞，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导后收集菌体蛋白，行SDS-PAGE电泳。将此融合蛋白Ni柱纯化后免疫BALB/C小鼠，Western-blot鉴定。结果 成功地构建了PET28a-NYD-SP15原核表达质粒，并获得了高效表达NYD-SP15的BL21菌株，表达的His标签融合蛋白，分子量为58KD左右，经免疫小鼠获得了抗NYD-SP15抗体。经Western-blotting法分析，抗体为NYD-SP15特异性抗体。结论 构建的NYD-SP15基因的原核表达载体，体外高效表达蛋白，免疫小鼠获得抗NYD-SP15抗体，将为眼部增殖性视网膜病变（PVR）的研究及治疗奠定坚实的基础。
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