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液氮低温保存对角膜缘上皮细胞活性和超微结构的影响 |
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| 液氮低温保存对角膜缘上皮细胞活性和超微结构的影响 |
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作者：高明宏 蓝… 文章来源：沈阳军区总医院眼科 点击数：1601 更新时间：2004/6/14 
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| 目的 探讨不同的低温冷冻条件对角膜缘上皮细胞的影响。方法 采用不同的冷冻条件保存兔角膜缘上皮组织；通过不同的体外培养方法观察冷冻角膜缘上皮细胞生长状态，并采用若丹明B染色法对原代角膜缘上皮细胞的增殖能力进行定量测定；将冷冻的角膜缘上皮组织进行器官培养，采用SABC免疫组织化学染色法测定rhEGF对冷冻角膜缘上皮细胞增殖核抗原（PCNA）表达的影响；并进行透射电镜观察。结果 体外培养显示，二甲基亚砜（DMSO）浓度梯度和降温速率对角膜缘上皮细胞增殖能力无显著影响（p>0.05）；组织块培养法优于消化培养法（p>0.05）；血清培养组优于无血清培养组（p<0.05,p<0.01）；1640优于MEM和DMEM （p<0.01）；3T3细胞滋养层组与巨噬细胞滋养层组结果相似（p>0.05）。免疫组织化学显示，冷冻的角膜缘上皮细胞核中均可见PCNA表达，染色阳性细胞主要在基底细胞层，EGF组的PCNA染色阳性率显著高于无EGF组（p<0.01）；而不同浓度的EGF组之间阳性率无显著差异（p>0.05）。透射电镜扫描显示，冷冻保存的人与兔角膜缘上皮细胞超微结构变化相似，器官培养第20天，角膜缘中间层和基底层上皮细胞只见细胞轮廓，细胞间桥粒尚可见；核溶解坏死；有的细胞核内可见凋亡小体。结论 角膜缘干细胞具有较强的血清依赖性和低温耐受性，角膜缘上皮组织适合液氮深低温保存。
【关键词】角膜缘上皮细胞 低温保存 细胞培养 PCNA 电镜 |
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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